脲酶的作用是極為專一的，它僅能水解尿素，水解的最終產(chǎn)物是氨和碳酸。土壤脲酶活性，與土壤的微生物數(shù)量、有機物質(zhì)含量、全氮和速效磷含量呈正相關。根際土壤脲酶活性較高，中性土壤脲酶活性大于堿性土壤。常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素情況。土壤中脲酶活性的測定是以脲素為基質(zhì)經(jīng)酶促反應后測定生成的氨量，也可以通過測定未水解的尿素量來求得。本方法是測定生成的氨量。
靛酚藍比色法基本原理：被測物浸提劑中的NH4+，在強堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚反應，生成水溶性染料靛酚藍，其深淺與溶液中的NH4+—N含量呈正相關。
1.試劑
所有試劑除注明者外，均為分析純。實驗用水均為蒸餾水或去離子水。
（1）10%尿素：稱取10g尿素，用蒸餾水溶至100ml；
（2）檸檬酸鹽緩沖液（PH6.7）：184克檸檬酸和147.5克氫氧化鉀溶于蒸餾水。將兩溶液合并，用1mol/L NaOH將PH調(diào)至6.7，用水稀釋至1000毫升；?
（3）苯酚鈉溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量無水乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用無水乙醇稀釋至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。將AB溶液保存在冰箱中。使用前將AB溶液各20毫升混合，用蒸餾水稀釋至100毫升；?
（4）次氯酸鈉溶液：用水稀釋試劑至活性氯的濃度為0.9%，溶液穩(wěn)定；
（5）氮的標準溶液（0.1mg/ml）：精確稱取0.4717克硫酸銨溶于水并稀釋至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的標準液。使用時將其稀釋10倍，即為氮工作液（0.01mg/ml）；?
（6）甲苯。
2．儀器設備
回旋式振蕩器、萬分之一分析天平、分光光度計、恒溫箱、記號筆等。
3.標曲溶液配置
（1）標準曲線的測定：
分別吸取氮工作液0、1.00、3.00、5.00、7.00、9.00ml移至50ml比色管中，加水至20ml，再加入4ml苯酚鈉的溶液，充分混合。緊接著加入3ml次氯酸鈉，隨加隨搖勻，放置20分鐘，用水稀釋至刻度。將顯色液在可見分光光度計上于578nm處，以1cm比色皿進行比色測定，以試劑空白為參比。以標準溶液氮含量為橫坐標，以吸光度值為縱坐標繪制標準曲線。
（2）土樣中脲酶活性的測定：
分別稱取適量過1mm篩的風干土樣于50ml離心管中，向其中加入1ml甲苯，以使土樣全部濕潤為宜。放置15分鐘后，加入10ml 10％尿素溶液和20ml檸檬酸緩沖液（pH6.7），并搖勻。將其放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24h。培養(yǎng)結束后，用熱至38℃水稀釋至刻度，充分搖蕩后離心。分別吸取1-5ml濾液于50ml顯色管中，加蒸餾水至20ml，充分震蕩，然后加入4ml苯酚鈉，充分混合，再加入3ml次氯酸鈉充分搖蕩，放置20分鐘，用水稀釋至刻度，溶液呈現(xiàn)靛酚的藍色（在1h內(nèi)保持穩(wěn)定）。在分光光度計上用1cm比色杯，于578nm處進行比色測定。
土壤脲酶活性以24小時1g土壤中NH3－—N的毫克數(shù)表示。
注：①無土對照：不加土樣，其他操作與樣品實驗相同，以檢驗試劑純度和基質(zhì)自身分解，整個實驗設1個。?
②無基質(zhì)對照：以等體積水代替基質(zhì)，其他與實驗相同。即考察各種溶液和土壤中氨氮存在帶來的影響。相當于其他實驗中所做的空白對照。整個實驗設1個。
③如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應增加分取倍數(shù)或減少培養(yǎng)的土樣。